白癜风的发病原因 http://baidianfeng.39.net/a_xcyy/151002/4705219.html新近发展的分子生物学诊断技术即基因和核酸诊断技术,在寄生虫病的诊断中显示了高度的敏感性和特异性,同时具有早期诊断和确定现症感染等优点。本项技术主要包括DNA探针(DNAprobe).聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和生物芯片(biochip)技术。
DNA探针技术
DNA探针(或称基因探针)是指用放射性核素、生物素酶或其他半抗原标记的特定DNA片段。在其与DNA样本杂交过程中,借助上述标记物可探查出特异性或差异性DNA。双链DNA的变性和复性特点是本技术的基础。经加热,或在强酸强碱作用下,双链DNA氢键被破坏,双股链分离,变成单链(此即变性);而当条件缓慢变为中性或温度下降(50°C左右)时,氢键恢复,分开的两股单链又重新合为互补的双链结构(此即复性)。DNA探针分子杂交就是将样本DNA分子经上述条件处理后,使其变性为单链状态,固定在载体硝酸纤维膜上,再与经小分子标记的DNA探针单链分子混合在一定条件下使它们互补杂交结合。将未杂交的成分洗脱后,标记物显色,即可观察结果。
目前,DNA探针已用于疟原虫、隐孢子虫、贾第虫、锥虫、巴贝虫、弓形虫、丝虫、血吸虫、棘球蚴、猪带绦虫肝片吸虫和猪囊虫等虫种的鉴定和相应疾病的诊断。
PCR技术
PCR是在引物介导下特异性扩增DNA的一种技术。它包括模板DNA热变性解链-引物与模板DNA退火-引物延伸3个步骤的循环过程。其基本原理是在实验条件下,根据温度的变化控制DNA解链和退火(引物与模板DNA结合),在引物启动和DNA聚合酶催化下,合成二引物特定区域内的DNA链。上述“解链一退火一延伸”3个连续步骤为一个循环。经过20~30个循环反应,可使引物特定区段的DNA量增加至少10倍。
此外,PCR具有特异性强敏感性高操作简便、快速、样品处理简单等优点。目前,PCR技术多用于寄生虫病的基因诊断,分子流行病学研究和种株鉴定分析等领域。已应用的虫种包括利什曼原虫、疟原虫、弓形虫、阿米巴、巴贝虫、旋毛虫、锥虫、隐孢子虫、贾第虫、猪带绦虫和丝虫等。
生物芯片技术
生物芯片技术是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术,具有高通量高集成、微型化、自动化、速度快等优点,其效率是传统检测手段的成百上千倍。目前已被广泛应用于生命科学，也包括寄生虫学领域。
(一)DNA芯片(genechip)
DNA芯片技术又称基因芯片技术,是目前研究最多、技术最成熟的生物芯片。它将集成电路、计算机、半导体、激光共聚焦扫描、荧光标记探针等技术结合为一体,使众多的寡核苷酸探针有规律地排列在硅片上(探针密度可达/cm2),用其可与带有荧光标记的DNA样品杂交,再通过计算机分析荧光信号获得待测DNA
样品的序列信息。DNA芯片技术具有快速、高效、敏感经济、自动化等特点,大大提高了基因探针的检测效率。在寄生虫学领域,DNA芯片技术主要用于病原体的诊断检测和基因分型。目前,有关疟原虫、血吸虫等重要寄生虫的基因芯片研究已有报道，针对弓形虫、绦虫和旋毛虫等食源性寄生虫的基因芯片研究也取得进展。
(二)蛋白质芯片(proteinchip)
蛋白质芯片技术本质上就是利用蛋白质之间的相互作用,对样本中存在的特定蛋白质进行检测。是将位置及序列为已知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原抗体以预先设计的方式固定在尼龙膜、硝酸纤维素膜、玻璃、聚丙烯酰胺凝胶等载体上组成密集的分子排列，当荧光免疫金等标记的靶分子与芯片上的探针分子结合后,通过激光共聚焦扫描或光耦合元件(CCD)对标记信号的强度进行检测,从而判断样本中靶分子的数量，以达到一次实验同时检测多种疾病或分析多种生物样本的目的。具有快速、高效、并行高通量等特点,是蛋白质组研究的重要手段。目前蛋白芯片技术已经在疟疾、弓形虫病和血吸虫病的诊断中发挥重要作用。
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